家蚕miR-0001和miR-0015体外下调BmFib-L基因的表达

目的：探究新发现的两个miRNA对家蚕丝素轻链基因BmFib-L的调控作用。创新点：在家蚕后部丝腺中发现两个新的miRNA,并首次证明它们对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L有负调控作用。方法：本实验通过生物信息学分析,从家蚕后部丝腺miRNA高通量测序获得的新miRNA中,筛选出两个可能对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L有调控作用的miRNA,即bmo-miR-0001和bmo-miR-0015。设计茎环引物,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法对家蚕5龄3 d头部、表皮、脂肪体、马氏管、精巢/卵巢、丝腺（前、中、后）、气管、中肠和血淋巴细胞等12个不同组织的bmo-miR-0001...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in:浙江大学学报：B卷英文版 2016, Vol.17 (2), p.127-135
Main Author: Chen CHEN Yang-yang FAN Xin WANG Fei SONG Tao JIANG Ping QIAN Shun-ming TANG Xing-jia SHEN
Format: Article
Language:English
Subjects:
BmFib-L
bmo-miR-0001
bmo-miR-0015
miRNA
功能验证
家蚕
Online Access:Get full text
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Description
Summary:目的：探究新发现的两个miRNA对家蚕丝素轻链基因BmFib-L的调控作用。创新点：在家蚕后部丝腺中发现两个新的miRNA,并首次证明它们对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L有负调控作用。方法：本实验通过生物信息学分析,从家蚕后部丝腺miRNA高通量测序获得的新miRNA中,筛选出两个可能对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L有调控作用的miRNA,即bmo-miR-0001和bmo-miR-0015。设计茎环引物,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法对家蚕5龄3 d头部、表皮、脂肪体、马氏管、精巢/卵巢、丝腺（前、中、后）、气管、中肠和血淋巴细胞等12个不同组织的bmo-miR-0001和bmo-miR-00015进行半定量表达分析。并采用双荧光报告基因检测系统进一步在细胞水平上验证bmo-miR-0001和bmo-miR-0015对BmFib-L表达的调控作用。结论：本实验中RT-PCR结果显示,这两个新miRNA在家蚕后部丝腺中表达量最高（图4）。双荧光报告基因检测结果显示,报告基因荧光素酶活性明显低于阳性对照组（图7）,转染bmo-miR-0001和bmo-miR-0015表达载体的细胞,报告基因和荧光素酶活性分别只及对照组60%和69%。t检验分析结果显示两个实验组与对照组之间差异都达到显著水平（P〈0.05）。由此可见,bmo-miR-0001和bmo-miR-0015在体外对BmFib-L的表达具有显著的抑制作用。
ISSN:1673-1581
1862-1783